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大鼠卵母細胞的采集及發(fā)育分型

更新時間:2025-04-03      點擊次數(shù):164
  大鼠超排可以用于研究環(huán)境污染物或藥物對生殖系統(tǒng)的毒性影響深入交流;通過誘導(dǎo)超排并觀察卵母細胞和胚胎的發(fā)育情況非常激烈,可以評估潛在的生殖毒性。大鼠卵母細胞的發(fā)育過程可以分為3個階段:GV期、MI期、MⅡ期。
 
  方法
 
  1.雌性SD大鼠,腹腔注射PMSG 60IU,注射PMSG 46-48h后去突破,腹腔注射hCG 20IU,誘導(dǎo)超排達到。
 
  2.準備卵母細胞培養(yǎng)滴:在60mm培養(yǎng)皿內(nèi)做若干水滴狀的滴智能設備,并用礦物油覆蓋,放入培養(yǎng)箱(37 ℃蓬勃發展、5%CO2)平衡4h以上(推薦過夜平衡)特點。
 
  3.卵母細胞采集的時間通常在SD大鼠注射hCG后13-16h內(nèi)進行。
 
  4.雌性SD大鼠背部重要性、腹側(cè)備皮又進了一步,酒精消毒背側(cè)、腹側(cè)皮膚多元化服務體系。在距離大鼠脊柱1cm規劃、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉深度,可見白色的脂肪組織帶動擴大,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢與時俱進,摘除卵巢及輸卵管性能,將其放入500μL的KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中初步建立。
 
  5.在體式顯微鏡下觀察到輸卵管的上部(壺腹部)有一個明顯的膨大處高效。用鑷子固定輸卵管,用一根1 ml注射器縱向撕開壺腹部要素配置改革,用此法將其整個撕裂體系,卵團會游離到KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。
 
  6.在KSOM胚胎培養(yǎng)液中再加入同體積的透明質(zhì)酸酶溶液(0.6mg/mL)帶動產業發展,用移液槍輕輕吹打幾下責任製,放入CO2培養(yǎng)箱中,1分鐘后取出倍增效應。
 
  7.在顯微鏡下用移卵管收集卵母細胞到卵母細胞培養(yǎng)滴中規則製定,并用剩下的液滴逐步清洗,清洗結(jié)束后放回37℃ CO2培養(yǎng)箱中。
 
  8. GV期關規定、MI期發展基礎、MⅡ期的卵母細胞。
 
  GV:這是卵母細胞生長和發(fā)育的早期階段建強保護,卵母細胞處于減數(shù)分裂的第一次分裂前期同期。
 
  MI:卵母細胞進入減數(shù)分裂的第一次中期。
 
  MⅡ期:這是卵母細胞成熟的最終階段使命責任,卵母細胞準備好受精
 
  注意事項:
 
  大鼠的輸卵管不直接與卵巢相連效果,而是緊貼卵巢表面,呈彎彎曲曲的形狀合規意識。大鼠輸卵管可分為漏斗部密度增加、壺腹部、峽部和子宮部創新內容。
 
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