簡(jiǎn)要描述:穩(wěn)定細(xì)胞株篩選是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中同期,用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選核心技術體系,篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白相對開放,或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株認為。
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一近年來、服務(wù)介紹
穩(wěn)定細(xì)胞株篩選常用物理方法(電轉(zhuǎn))狀況、化學(xué)方法(脂質(zhì)體等)便利性、生物方法(病毒)統籌。
二最深厚的底氣、實(shí)驗(yàn)原理
外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)表達(dá)振奮起來,一類是穩(wěn)定表達(dá)(又叫表達(dá))品質。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá)勞動精神,但通常只持續(xù)幾天開展攻關合作。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可*表達(dá)目的基因預下達。建立穩(wěn)定細(xì)胞株的有效手段,一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素(hygromycin)方案、和嘌呤霉素(puromycin)關鍵技術。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1深入、載體構(gòu)建(表達(dá)質(zhì)粒載體技術研究、病毒載體)重要的;
2、轉(zhuǎn)染/感染結論;
3和諧共生、目的蛋白初步檢測(cè);
4適應性強、抗生素篩選技術交流;
5、目的蛋白再次檢測(cè)(定性/半定量)拓展;
6創造更多、單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測(cè)。
四不斷進步、 客戶提供
培養(yǎng)好的細(xì)胞
五工藝技術、 公司提供:
基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片規模、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株
實(shí)驗(yàn)周期:大約3-4月左右近年來,具體需要根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
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