實驗共分以下4個主要步驟:

1.細胞鋪盤

HeLa S3細胞更高效，密度為80%左右分盤，使鋪盤密度在50%左右綜合措施， 為滿足流式細胞儀上機要求可靠保障，細胞數(shù)目需大于1x10組。2.細胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b)用溫育的PBS洗4次設計標準，更換新鮮培養(yǎng)基開展，培養(yǎng)9h

c)再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集;

a)分別收取釋放2h(S期)，6h(G2/M期)和12h(G1期)細胞樣品

b)每個樣品收取都使用預冷的PBS洗滌4次發揮重要帶動作用，1000g離心5min, 棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀意向，吸取出細胞懸液于移液器中，于移去細胞的管中加入900μl預冷的70%乙醇文化價值，旋渦振蕩器震蕩中滴入細胞懸液形式。

d) 4C固定一小時或更 長時間。

e) 1500rmp不斷完善，離心10min,去固定液數字化。

f)細胞染色液配制: 50xRNase A母液: 50xPI母液: PBS=20: 20: 960; RNase A母液濃度1mg/mL，工作濃度20μg/mL; PI母液濃度2.5mg/mL, 工作濃度50μg/mL 基礎上。

g)細胞37度染色1h各領域。根據(jù)細胞童，加入一定體積的細胞染色液(1~1.5mL) 重懸融合，使上機時細胞通過率為

200~350Cl/s深入闡釋，,染色液不可過多或過少，過多則細胞密度過低上機速度嚴重不足完成的事情，過少則導致細胞粘結(jié)物聯與互聯。

h) 300目篩網(wǎng)過濾至流式管中。

4.上機檢測;

流式細胞儀上機檢測改造層面，計數(shù)50000個細胞供給。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)使用ModFit軟件分析優勢與挑戰。