1. SD大鼠，250g支撐能力，通過頸椎脫位處死大鼠重要的，浸入75%乙醇浸泡5分鐘我有所應，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中全方位。

2. 打開皮膚實施體系，暴露快速融入、收集股骨最新，無菌狀態(tài)下移除附著的肌肉和組織。

3. 并轉(zhuǎn)移股骨至預(yù)冷含雙抗的PBS中顯示，洗滌三次雙向互動。冰上操作。

4. 切斷股骨骨骺創新能力， 使用5mlPBS新品技，1ml注射器針頭沖洗，沖洗液由棕色變成粉紅色即可（股骨變白）求得平衡。沖洗后紮實做，用1ml注射器吹打3-5次。

5. 70um濾網(wǎng)過濾至關重要，棄去篩網(wǎng)提供深度撮合服務。使用 15ml 離心管，先加入分離液的發生，然后緩慢加入濾過的懸液組成部分。20℃環(huán)境下，600g 離心 25min新的動力。

6. 離心后的過程中，離心管中液體由上至下分為四層。第一層為稀釋液層廣泛關註。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層促進進步。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層優勢領先。

7. 小心吸取離心管中的迎來新的篇章，環(huán)狀乳白色單個核細胞層，轉(zhuǎn)移到新離心管中推動並實現，加入 5-10ml 洗滌液薄弱點，混勻細胞。400g，離心 10min積極性。

8. 棄去上清奮勇向前，用吸管吸取 5ml 清洗液重懸所得細胞。 250g多元化服務體系，離心 10min貢獻力量，棄去上清。 再用M199培養(yǎng)基（含10 ng/mL VEGF大幅拓展，1 ng/mL b-FGF，1 ng/mL EGF更加堅強，20%胎牛血清與時俱進、1%雙抗）清洗一次，棄去上清初步建立，M199培養(yǎng)基重懸細胞綜合運用。250g，離心 10min的方法，棄去上清實事求是。M199培養(yǎng)基重懸細胞，計數(shù)落到實處。

9. 按3×10⁶/孔種入纖連蛋白包被過的24孔板服務水平，每3天換一次培養(yǎng)基，以去除非貼壁細胞技術創新，持續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)2-3周處理方法。