1. C57小鼠邁出了重要的一步,8-10周充分發揮,通過(guò)頸椎脫位處死方案,浸入75%乙醇浸泡5分鐘便利性,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中堅持先行。
2. 使用眼科剪和鑷子服務水平,使髖關(guān)節(jié)脫臼發展機遇,保持股骨頭完整可靠保障。
3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽影響,將組織放入含2%雙抗的PBS中新的動力。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中發展契機。
5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片廣泛關註,加入3ml預(yù)熱的Collagenase D(1.5mg/ml)。
6. 放入37℃發力、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化優勢領先,時(shí)間2h 。
7. 第一次消化結(jié)束后共創美好,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化不可缺少,40um的細(xì)胞篩過(guò)濾后,離心1500rpm特點,2min積極回應。
8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸,計(jì)數(shù)又進了一步,種植在24孔板中多種場景。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,放入37℃規劃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化擴大公共數據,時(shí)間2h深度,然后收集細(xì)胞。
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