研究背景

鐵死亡（Ferroptosis）是一種由鐵依賴性脂質(zhì)過氧化驅(qū)動的調(diào)節(jié)性細胞死亡形式服務體系，近年來被證實與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，特別是在腫瘤領(lǐng)域搶抓機遇。鐵死亡的調(diào)控涉及多個因素分析，其中NRF2是一個關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄共激活因子，通過調(diào)控其靶基因（如GPX4）來抑制鐵死亡全面闡釋。此外非常激烈，CLDN6（緊密連接蛋白6）作為一種重要的腫瘤抑制因子，在乳腺癌中的表達下調(diào)法治力量，且與鐵死亡的關(guān)聯(lián)尚未明確全技術方案。本研究旨在深入探討CLDN6與鐵死亡之間的聯(lián)系，并揭示其在乳腺癌中的潛在調(diào)控機制共享，以期為乳腺癌的預(yù)后預(yù)測和治療提供新的視角和靶點信息化。

研究內(nèi)容

實驗結(jié)果總結(jié)

（一）CLDN6與鐵死亡的預(yù)后意義

研究團隊通過下載GEO中乳腺癌數(shù)據(jù)，分析CLDN6發(fā)現(xiàn)其在正常乳腺組織中高表達生動，而在乳腺癌組織中低表達新型儲能。通過加權(quán)基因共表達網(wǎng)絡(luò)分析（WGCNA），發(fā)現(xiàn)與CLDN6共表達的基因主要富集在鐵死亡新品技、谷胱甘肽代謝和磷酸戊糖途徑中範圍。此外，CLDN6的表達與鐵死亡評分呈正相關(guān)紮實做，且低CLDN6表達的患者NRF2表達更高空間廣闊。TCGA和乳腺癌組織微陣列（TMA）中展現(xiàn)出強大的預(yù)后預(yù)測能力，優(yōu)于單獨的CLDN6表達或鐵死亡評分提供深度撮合服務。

（二）CLDN6觸發(fā)乳腺癌細胞中的鐵死亡

細胞功能實驗驗證（MDA-MB-231和MCF-7）服務品質，CLDN6的過表達抑制了乳腺癌細胞的活力和克隆形成能力，且這種抑制作用可通過沉默CLDN6恢復(fù)組成部分。CLDN6過表達的細胞對多種鐵死亡誘導(dǎo)劑（如索拉非尼和RSL3）的敏感性增加影響，且這種敏感性增強可被鐵死亡抑制劑Fer-1逆轉(zhuǎn)，而壞死抑制劑NSA或凋亡抑制劑Z-VAD-FMK則無此效果的過程中。在超微結(jié)構(gòu)和生化水平上發展契機，CLDN6過表達導(dǎo)致線粒體體積減小、膜密度增加促進進步，同時活性氧（ROS）和脂質(zhì)過氧化增加發力，谷胱甘肽（GSH）水平降低，這些變化可被Fer-1逆轉(zhuǎn)。這些結(jié)果表明CLDN6能夠誘導(dǎo)乳腺癌細胞發(fā)生鐵死亡持續創新。

（三）CLDN6通過AKT/GSK3β/FYN軸促進NRF2核輸出誘導(dǎo)鐵死亡

進一步富集分析發(fā)現(xiàn)改善，差異表達基因主要富集在緊密連接、鐵死亡協調機製、脂肪酸生物合成信息化、谷胱甘肽代謝和NRF2通路中。預(yù)測NRF2可能是CLDN6和鐵死亡之間的關(guān)鍵所在實踐者。實驗結(jié)果顯示平臺建設，CLDN6不改變NRF2 mRNA水平，但降低了NRF2及其靶基因（包括GPX4和G6PD）的蛋白水平貢獻力量，并減少了NRF2在細胞核中的蛋白水平和定位使用。這些結(jié)果表明CLDN6抑制了NRF2的激活和核定位。研究還發(fā)現(xiàn)發行速度，CLDN6降低了AKT在Ser473位點的磷酸化水平和GSK3β在Ser9位點的磷酸化水平更加堅強，同時增加了核內(nèi)FYN的表達，暗示CLDN6可能通過AKT/GSK3β/FYN軸促進NRF2的核輸出性能。

（四）CLDN6通過PBK調(diào)節(jié)AKT/GSK3β/FYN軸

研究發(fā)現(xiàn)初步建立，CLDN6不顯著影響PBK的mRNA水平，但降低了其蛋白表達供給。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）介導(dǎo)的降解在PBK蛋白穩(wěn)定性中起著重要作用的方法。實驗顯示，CLDN6不改變經(jīng)蛋白酶體抑制劑MG-132處理后的PBK蛋白水平進行探討，但顯著縮短了PBK的半衰期落到實處，并在蛋白酶體降解被抑制時增加了PBK的泛素化水平，表明CLDN6通過UPS加速了PBK的降解最新。PBK過表達增加了AKT和GSK3β的磷酸化水平技術創新，并降低了核內(nèi)FYN的水平。此外重要作用，PBK增加了總蛋白增多、核蛋白、NRF2的核定位以及G6PD和GPX4的表達有望。使用NRF2抑制劑ML385后，發(fā)現(xiàn)CLDN6和PBK過表達的細胞中NRF2導向作用、G6PD和GPX4的表達降低方案。進一步結(jié)果表明，PBK降低了對多種鐵死亡誘導(dǎo)劑十大行動、ROS和脂質(zhì)過氧化物水平的敏感性左右。這些發(fā)現(xiàn)表明CLDN6通過PBK調(diào)節(jié)AKT/GSK3β/FYN軸，誘導(dǎo)NRF2介導(dǎo)的鐵死亡。

（五）CLDN6與DLG1/PBK復(fù)合體的相互作用需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑

PBK的亞細胞定位對其功能至關(guān)重要可靠保障，而CLDN6與PBK在細胞膜上共定位自然條件。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向細胞膜的運輸和循環(huán)需要VPS35和SNX27的參與。研究發(fā)現(xiàn)高端化，CLDN6促進了PBK與VPS35陽性retromer復(fù)合體和SNX27的共定位力量，表明CLDN6通過促進retromer復(fù)合體介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑將PBK運輸?shù)郊毎ぁＭㄟ^共免疫沉淀實驗發(fā)現(xiàn)PBK與CLDN6具有結(jié)合親和力提單產。結(jié)構(gòu)分析顯示深入實施，CLDN6和PBK均含有PBM，而DLG1含有三個PDZ結(jié)構(gòu)域發展空間。通過分子對接發(fā)現(xiàn)CLDN6的PBM與DLG1的PDZ結(jié)構(gòu)域穩(wěn)定結(jié)合效果。實驗結(jié)果表明，CLDN6不增加DLG1的表達足了準備，但能與DLG1結(jié)合合作關系，并在細胞膜上共定位。這些數(shù)據(jù)表明CLDN6招募DLG1/PBK復(fù)合體到細胞膜深刻內涵。為了闡明CLDN6的PBM在連接DLG1和PBK中的作用傳遞，研究團隊在乳腺癌細胞中轉(zhuǎn)染了缺乏PBM的CLDN6。結(jié)果表明交流等，缺乏PBM的CLDN6不再與DLG1或PBK共定位更加廣闊，且不影響PBK蛋白水平，也無法與DLG1或PBK結(jié)合提高。這強調(diào)了CLDN6的PBM在招募DLG1/PBK復(fù)合體中的不可缺性可以使用。這些結(jié)果為CLDN6通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑招募PBK并與DLG1/PBK復(fù)合體結(jié)合提供了證據(jù)。

（六）CLDN6在體內(nèi)誘導(dǎo)乳腺癌鐵死亡

為了評估CLDN6對鐵死亡的影響紮實，研究團隊建立了裸鼠皮下異種移植瘤模型效高化。結(jié)果表明，CLDN6過表達組的腫瘤體積和重量均小于對照組投入力度，且索拉非尼處理加劇了這些變化創造。通過透射電子顯微鏡（TEM）觀察到，CLDN6導(dǎo)致線粒體膜密度增加和脂滴增加貢獻法治，以及線粒體嵴減少設備製造，這些變化在索拉非尼處理后更為明顯。這些結(jié)果表明CLDN6在體內(nèi)誘導(dǎo)鐵死亡攻堅克難。異種移植瘤組織的IHC染色和WB檢測顯示管理，CLDN6過表達和索拉非尼處理組的NRF2和GPX4表達低于對照組。IF染色顯示CLDN6雙向互動、DLG1和PBK在細胞膜上共定位效率和安。這些發(fā)現(xiàn)表明CLDN6在體內(nèi)誘導(dǎo)鐵死亡設計能力，并抑制NRF2和GPX4的表達。

研究結(jié)論

本研究揭示了CLDN6在乳腺癌中鐵死亡中的關(guān)鍵作用及其潛在機制極致用戶體驗。研究發(fā)現(xiàn)提供有力支撐，CLDN6通過招募DLG1/PBK復(fù)合體并調(diào)節(jié)PBK依賴的AKT/GSK3β/FYN軸，增強NRF2的核輸出建議，從而觸發(fā)NRF2介導(dǎo)的鐵死亡品率。此外，CLDN6與鐵死亡的整合在預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后方面表現(xiàn)出顯著的性能用的舒心，為乳腺癌的預(yù)后評估和治療選擇提供了新的生物標志物技術發展。研究還表明，CLDN6通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑將PBK招募至細胞膜集成，并與DLG1/PBK復(fù)合體結(jié)合重要手段，促進PBK的降解。這些發(fā)現(xiàn)不僅為理解CLDN6在乳腺癌中的作用提供了新的視角穩定性，還為開發(fā)針對鐵死亡的治療策略提供了理論基礎(chǔ)像一棵樹。

Qi D, Lu Y, Qu H, Dong Y, Jin Q, Sun M, Quan C. CLDN6 triggers NRF2-mediated ferroptosis through recruiting DLG1/PBK complex in breast cancer. Cell Death Dis. 2025 Feb 21;16(1):122. doi: 10.1038/s41419-025-07448-9. PMID: 39984471; PMCID: PMC11845765.