簡要描述:免疫熒光又稱免疫熒光抗體不要畏懼。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上方便,直接與相應抗原反應充分發揮。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高良好,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位優勢與挑戰。上海伊萊博致力于臨床前藥效學CRO實驗,多年的免疫熒光染色技術服務的經(jīng)驗促進善治,為廣大藥效學實驗提供保障擴大。
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一新格局、制片
選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,洗凈后浸泡于無水/醇和乙氧,基乙,烷等量混合液中安全鏈。用時取出用綢布擦凈顯示。將待檢樣品如組織塊剪成適當大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品進一步完善。
二集聚、固定
除研究細胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,一般均應固定調整推進。
三狀況、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,最后以蒸餾水沖洗機製,防止自發(fā)性熒光全過程。
四、染色
染色分直接染色法與間接染色法探討。
1. 材料與試劑
(1)熒光抗體不負眾望,稀釋至應用濃度。
(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液
(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液調解製度。甘油有減少非特異性熒光的作用精準調控。
(4)帶蓋方盤
2. 直接染色法
(1)將固定好的玻片置于濕盤中,滴加熒光抗體染色液創新內容,以覆蓋為度機遇與挑戰,加蓋,37℃感做30
min~45min善於監督。
(2)PBS沖洗3次集成技術,每次沖洗3 min,即3x3沖洗更合理。
(3)蒸餾水沖洗適應能力。
(4)滴甘油緩沖液一滴,封片各方面,熒光顯微鏡檢查防控。
3. 間接染色法
(1)檢查抗原:
①取固定標本成效與經驗,加已知的免疫血清,37℃孵育30 min堅實基礎。
②以PBS液3x3沖洗稍有不慎。
③再加熒光標記的抗抗體,37℃℃孵育30 min等地。
④PBS 3x3沖洗最為顯著。
⑤H2O沖洗,涼干規定。
6加甘油緩沖液環境,封片、鏡檢責任。
(2)檢查抗體:
①免疫后動物的淋巴組織涂片應用情況,自然干燥,甲醇固定組建,
2)滴加相應抗原液(按1:100~1:500稀釋)表現,37℃孵育30 min。
③PBS液3x3沖洗作用。
④加熒光抗體相互配合,37℃孵育30 min。
⑤PBS液3x3沖洗著力增加。
⑥水洗智能化,涼干。
⑦加甘油緩沖液處理,封片建設、鏡檢。
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