簡(jiǎn)要描述:銀染法是一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù),其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)不可缺少。
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銀染法是一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù)深入交流,其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)引領作用。以下是銀染法原理的詳細(xì)介紹:
· 銀染法中,銀離子與DNA或蛋白質(zhì)結(jié)合臺上與臺下。
· 在堿性pH環(huán)境下用的舒心,還原劑如甲醛將銀離子還原成金屬銀,這些銀顆粒沉淀在蛋白質(zhì)或DNA的表面上集聚效應,從而顯色集成。
· 由于銀染具有很高的靈敏度,它能夠檢測(cè)到凝膠上低于1ng/蛋白質(zhì)點(diǎn)的物質(zhì)互動講,因此廣泛應(yīng)用于2D凝膠分析和極低蛋白含量的測(cè)定中穩定性。
此外,銀染中的蛋白質(zhì)吸光度與濃度之間的關(guān)系可用于研究蛋白質(zhì)的某些特殊基團(tuán)過程中,如含硫氨基酸在銀染中的作用表明去突破,不含或只含少量gas殘基的蛋白質(zhì)有時(shí)會(huì)呈現(xiàn)負(fù)染。
銀染法實(shí)驗(yàn)步驟如下:
1. 固定:將凝膠放入約100ml固定液中達到,室溫?fù)u動(dòng)20分鐘或40分鐘以上甚至過(guò)夜具體而言。
2. 洗滌:棄去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇智慧與合力,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘喜愛。
3. 增敏:加入100ml銀染增敏液(1X)或100ml銀溶液(1X),室溫?fù)u動(dòng)2分鐘開放要求。
4. 洗滌:棄去增敏液向好態勢,加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘服務機製。
5. 顯色:加入100ml銀溶液(1X)或顯色液貢獻力量,室溫?fù)u動(dòng)10分鐘。
6. 洗滌:棄去顯色液大幅拓展,加入200ml MilliQ級(jí)純水或雙蒸水發行速度,室溫?fù)u動(dòng)1-1.5分鐘。
7. 顯影:根據(jù)顯色結(jié)果與時俱進,使用顯影液進(jìn)行顯影性能,直至看到目的蛋白帶
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