簡(jiǎn)要描述:穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實(shí)驗(yàn):穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株)指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)預下達。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上提供了有力支撐,使細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)該基因組織了。
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穩(wěn)轉(zhuǎn)株長(zhǎng)用于基因研究方向深入開展,便于長(zhǎng)期觀察和檢驗(yàn)基因?qū)τ诩?xì)胞功能以及蛋白的相互作用更為一致。
一般轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方法:
用轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞建議,根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的試劑進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆品率。在陽(yáng)性混合克隆的基礎(chǔ)上,得到單細(xì)胞長(zhǎng)出的陽(yáng)性單克隆不斷發展,繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株技術發展。
一般篩選方法:
1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后集成,單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系
對(duì)大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對(duì)于基因過(guò)表達(dá)互動講,如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%穩定性,基因過(guò)表達(dá)尚可。但是對(duì)于基因干擾實(shí)驗(yàn)過程中,對(duì)轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過(guò)表達(dá)去突破,通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無(wú)法滿足。
另外達到,質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中智能設備,很快降解,無(wú)法滿足較長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)項(xiàng)目蓬勃發展;質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低特點,穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時(shí)耗力,且得率很低重要性,往往需要挑取單克隆株又進了一步。
2多種場景、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法規劃。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株擴大公共數據,由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄帶動擴大、高效表達(dá)核心技術體系、宿主范圍廣,感染效率高持續發展,且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排必然趨勢,是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。
服務(wù)內(nèi)容:1供給、穩(wěn)定:15代以內(nèi)細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)的方法。
2、迅速:一般控制在1個(gè)月以內(nèi)完成構(gòu)建保障性。
3帶動產業發展、經(jīng)濟(jì):價(jià)格實(shí)惠。
4十分落實、質(zhì)量:對(duì)外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定倍增效應。
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