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簡(jiǎn)要描述：分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建：分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA的片段的方法方式之一。常含有目的基因優勢與挑戰，用體外重組方法將它們插入克隆載體各有優勢，形成重組克隆載體高質量，通過(guò)轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式增幅最大，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增預下達，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體結構重塑，可以得到插入DNA的許多拷貝拓展，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。
更新時(shí)間：2024-10-12廠商性質(zhì)：代理商訪 問(wèn) 量：828產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
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一探討、實(shí)驗(yàn)原理
外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組大型，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+明確相關要求、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中重要意義，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶深化涉外。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能體系，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒(méi)有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來(lái)開展試點。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低攜手共進，一般可通過(guò)提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來(lái)提高平末端的連接效率。
T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步：T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物推進一步；然后經過，酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化力度；后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵明確了方向，把切口封起來(lái)。
DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法勇探新路，為了防止載體本身的自連單產提升，可以通過(guò)(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。
連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性.但是在這個(gè)溫度下試驗，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的行動力。因此人們找到了一個(gè)折中溫度，即12-16℃切實把製度，連接12-16h(過(guò)夜)保供，這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定進行部署。
二責任、實(shí)驗(yàn)流程
目的DNA的擴(kuò)增和純化；
連接反應(yīng)保護好；
電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物組建。
三、客戶提供
樣本DNA特點，基因序列深刻變革，試劑盒。
四部署安排、公司提供
構(gòu)建好的載體搖籃，電泳膠圖技術，測(cè)序結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)周期：大約1-2月推動。
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