chip-seq蛋白技術(shù)服務(wù)

chip-seq蛋白技術(shù)服務(wù)簡(jiǎn)單介紹： 染色質(zhì)免疫共沉淀:染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)主要應(yīng)用于驗(yàn)證及探尋體內(nèi)環(huán)境中可持續，蛋白質(zhì)和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白質(zhì)在DNA上的特定結(jié)合序列，常在研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及組蛋白修飾中被應(yīng)用到。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程大致為：交聯(lián)-解交聯(lián)-超聲打碎-免疫沉淀-洗滌-DNA純化-PCR檢測(cè)信息化。
 
具體操作：
樣品準(zhǔn)備：培養(yǎng)細(xì)胞(若樣品為組織，可先培養(yǎng)原代細(xì)胞)實踐者；固定充分發揮，或者直接活細(xì)胞送樣。
 
細(xì)胞固定：此步驟目的為將結(jié)合在DNA上的蛋白用共價(jià)形式交聯(lián)在所結(jié)合的位點(diǎn)上共創美好，避免在之后的操作步驟中脫離丟失。直接將甲醛加入細(xì)胞培養(yǎng)液薄弱點，搖晃固定10分鐘后覆蓋範圍，迅速加入2.5M甘氨酸解交聯(lián)5分鐘，PBS洗滌積極性，刮下細(xì)胞奮勇向前。
 
超聲打碎：此步驟目的為將長(zhǎng)鏈的DNA打碎成200-1000bp的DNA的片段。使用設(shè)備是超聲水浴鍋實施體系，EP管在冰水混合物中超聲組建，超聲后細(xì)胞懸液變得澄清透明。離心取上清效果較好。
 
免疫沉淀：此步驟是加入特異性抗體和對(duì)照IgG重要的意義，和結(jié)合抗體的磁珠（或protein A/G）。經(jīng)稀釋后等多個領域，超聲產(chǎn)物分成兩份再獲，分別加入特異性抗體和對(duì)照IgG，輪轉(zhuǎn)過(guò)液應用擴展，第二天加入磁珠輪轉(zhuǎn)4小時(shí)體驗區。
 
洗滌：此步驟是減少非特異性結(jié)合。分別用稀釋緩沖液活動上、低鹽溶液有望、高鹽溶液、氯化鋰溶液以及TE緩沖液洗滌共7次導向作用。用洗脫緩沖液在65℃洗脫過(guò)液方案。
 
DNA純化：將洗脫的產(chǎn)物用DNA純化試劑盒純化，得到50ul純化產(chǎn)物堅持好，用于檢測(cè)ChIP結(jié)果即將展開。

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