甲基化檢測(cè)

簡(jiǎn)要描述：甲基化檢測(cè) DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一傳遞，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶更讓我明白了，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶優勢。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控數字技術。

更新時(shí)間：2024-06-17
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1．甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR措施，MSP）

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA大大縮短，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為nmd，而甲基化的胞嘧啶不變緊密相關；隨后設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR更默契了。通過電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物，如果用針對(duì)處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段培訓，則說明該位點(diǎn)存在甲基化不合理波動；反之，說明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化重要工具。

2．亞硫酸氫鹽測(cè)序法（Bisulfite sequencing PCR積極拓展新的領域，BSP）

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為nmd更優質，而甲基化的胞嘧啶不變相對開放。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR，在擴(kuò)增過程中nmd全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶技術創新，最后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測(cè)序方法深入交流研討。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測(cè)序資料，可以提高測(cè)序成功率廣泛應用，這種方法稱為BSP-克隆測(cè)序法。

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