01選擇熒光探針常用的熒光染料是DCFH-DA不斷創新，它能夠進(jìn)入細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)被酯酶水解成DCFH有很大提升空間。DCFH隨后可以被細(xì)胞內(nèi)的活性氧氧化高效，生成發(fā)熒光的DCF的特點。

02DCFH-DA是一種用于檢測活性氧ROS的熒光探針健康發展，全稱為2,7-二氯熒光素二乙酸酯。其工作原理為：DCFH-DA本身沒有熒光大數據，但可以自由穿過細(xì)胞膜長效機製，一旦進(jìn)入細(xì)胞，它會被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成DCFH數字技術，由于DCFH無法穿過細(xì)胞膜奮戰不懈，因此熒光探針會在細(xì)胞內(nèi)積聚。細(xì)胞內(nèi)的ROS能夠氧化無熒光的DCFH，生成有熒光的DCF大大縮短，且熒光強(qiáng)度與ROS水平成正比要落實好。通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡等設(shè)備更默契了，在最大激發(fā)波長480nm和最大發(fā)射波長525nm下檢測熒光信號先進技術。

03步驟裝載探針

對于刺激時間較短(通常為2小時以內(nèi))的細(xì)胞，先裝載探針不合理波動，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞宣講手段。對于細(xì)胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞積極拓展新的領域，后裝載探針基礎。

原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA拓展基地，使終濃度為10微摩爾/升集中展示。去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入適當(dāng)體積稀釋好的DCFH-DA體系流動性。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜探索創新，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘實現了超越。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次新產品，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA。通硺蛄鹤饔?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ?xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平長遠所需。

收集細(xì)胞后裝載探針：按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升讓人糾結。細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中規模，細(xì)胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘基石之一。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下聯動，使探針和細(xì)胞充分接觸。用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次共同努力，以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DCFH-DA行業內卷。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，或把細(xì)胞等分成若干份后刺激細(xì)胞逐漸完善。通硡⑴c能力；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ?xì)胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。