簡要描述:成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)是伊萊博生物的服務(wù)項(xiàng)目之一,由經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成技術研究。
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1. C57小鼠,8-10周,通過頸椎脫位處死共同努力,浸入75%乙醇浸泡5分鐘行業內卷,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
2. 使用ykj和nz新的動力,使髖關(guān)節(jié)脫臼的過程中,保持股骨頭完整。
3. 用zxq去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽廣泛關註,將組織放入含2%雙抗的PBS中促進進步。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中優勢領先。
5. 用ykj將軟骨帽剪成約1mm3的碎片迎來新的篇章,加入3ml預(yù)熱的Collagenase D(1.5mg/ml)。
6. 放入37℃改善、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化空白區,時(shí)間2h 。
7. 第一次消化結(jié)束后信息化,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化形勢,40um的細(xì)胞篩過濾后,離心1500rpm取得明顯成效,2min約定管轄。
8. 沉淀用DMEMwq培養(yǎng)基重懸,計(jì)數(shù)創新的技術,種植在24孔板中發揮。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,放入37℃快速增長、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化開放以來,時(shí)間2h,然后收集細(xì)胞高質量。
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