簡要描述:免疫熒光染色服務(wù):免疫熒光又稱免疫熒光抗體組建。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應(yīng)的抗體上,直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)參與水平。其優(yōu)點是方法簡便行業分類、特異性高組建,非特異性熒光染色少紮實,相對使用標記抗體用量偏大推動並實現。利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位範圍。
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免疫熒光染色服務(wù)一、制片
選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片自然條件,洗凈后浸泡于無水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中設計標準。用時取出用綢布擦凈開展。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品我有所應。
免疫熒光染色服務(wù)二提單產、固定
除研究細胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,一般均應(yīng)固定至關重要。
三發展空間、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,最后以蒸餾水沖洗有所應,防止自發(fā)性熒光足了準備。
四、染色
染色分直接染色法與間接染色法認為。
1. 材料與試劑
(1)熒光抗體系統,稀釋至應(yīng)用濃度增強。
(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液
(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液重要意義。甘油有減少非特異性熒光的作用。
(4)帶蓋方盤
2.直接染色法
(1)將固定好的玻片置于濕盤中更加廣闊,滴加熒光抗體染色液規劃,以覆蓋為度,加蓋可以使用,37℃感做30min~45min,
(2)PBS沖洗3次進入當下,每次沖洗3 min,即3x3沖洗效高化。
(3)蒸餾水沖洗新體系。
(4)滴甘油緩沖液一滴,封片創造,熒光顯微鏡檢查不難發現。
3. 間接染色法
(1)檢查抗原:
①取固定標本,加已知的免疫血清設備製造,37℃孵育30 min發展需要。
②以PBS液3x3沖洗。
③再加熒光標記的抗抗體管理,37℃孵育30 min顯示。
④PBS 3x3沖洗。
⑤H2O沖洗效率和安,涼干設計能力。
⑥加甘油緩沖液,封片深入開展、鏡檢提供有力支撐。
(2)檢查抗體:
①免疫后動物的淋巴組織涂片深入交流,自然干燥,甲醇固定加強宣傳。
②滴加相應(yīng)抗原液(按1:100~1:500稀釋)臺上與臺下,37℃孵育30 min。
③PBS液3x3沖洗技術發展。
④加熒光抗體集聚效應,37℃孵育30 min。
⑤PBS液3x3沖洗重要手段。
⑥水洗互動講,涼干。
⑦加甘油緩沖液像一棵樹,封片過程中、鏡檢。
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