肺纖維化動物模型動物的選擇

目前極致用戶體驗，肺纖維化動物模型有采用體型較小鼠類（如小鼠防控、大鼠、倉鼠等）和兔足夠的實力。其中 C57BL/6 小鼠緊迫性、BALA/C 小鼠、KM 小鼠和 ICR 小鼠更適合，Wistar 大鼠和SD 大鼠是用于肺纖維化模型是常用的種類高效，也有選用體型較大的犬、豬、羊和靈長類動物等體系，模型選用的動物種類因研究目的和造模方法不同而異帶動擴大。

鼠類是較多選用的肺纖維化動物模型，體型小開拓創新、體重輕、價格便宜必然趨勢，有氣管灌注促進善治、霧化吸入、經(jīng)鼻給藥多樣性、腹腔注射發揮效力、靜脈注射等多種給藥方式，是常用的造模動物真諦所在，但因其體型太小不適用于放射影像學(xué)的研究指導，需要通過解剖摘取肺部進(jìn)行組織病理學(xué)檢查的方法判斷造模是否成功。

豬充分、猴等大型動物體型大進一步完善，心臟及肺部組織結(jié)構(gòu)與人相似，并且可通過影像學(xué)方法在無創(chuàng)條件下動態(tài)觀察動物造模情況競爭力，但價格昂貴調整推進，操作較復(fù)雜。

造模方法

目前已建立多種誘發(fā)動物肺纖維化模型的方法機製性梗阻，包括基因相關(guān)模型與非基因相關(guān)模型機製。基因相關(guān)模型是指通過基因工程使動物成為肺纖維化模型集成應用，而非基因相關(guān)模型是指在相同或相似的遺傳背景下探討，通過環(huán)境因素、藥物毒物或其他因素誘導(dǎo)得到的肺纖維化模型高效流通。

一調解製度、肺纖維化動物模型基因相關(guān)方法致肺纖維化模型

轉(zhuǎn)基因方法包括細(xì)胞因子過表達(dá)法、靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法有效性。

1SD大鼠細(xì)胞因子過表達(dá)法致肺纖維化模型步驟

前期準(zhǔn)備：AdTGF-β1223/225 及腺病毒空載體 -70℃保存創新內容，臨用前經(jīng)病毒稀釋液稀釋成 1×109pfu（病毒稀釋液由三種溶液構(gòu)成，其配制方法：A 液：NaCl 8 g廣泛關註，KCl 0.2 g善於監督，Na2HPO4 1.15 g，KH2PO4 0.2 g就能壓製，加雙蒸水定容至100 mL更合理，高壓消毒；B 液：CaCl2·2H2O 0.1 g 定容至 10 mL，高壓消毒各方面；C 液：MgCl2·6H2O 0.1 g 定容至 10 mL防控，高壓消毒。用前取 98 mL A 液適應性、1 mL B 液堅實基礎、1 mL C 液混合備用。

操作步驟：選用 SD 大鼠重要作用，體質(zhì)量（250±15） g行動力，腹腔注射速眠新麻醉（0.4 mL·kg-1），無菌操作切實把製度，剪開頸部皮膚保供，鈍性分離頸部肌肉，充分暴露氣管進行部署，經(jīng)喉頭下一次性注入 0.4 mL AdTGF-β1223/225 腺病毒液責任，手術(shù) 6 h 后觀察并記錄動物生理反應(yīng)。

模型驗(yàn)證：分別與造模后 d 7保護好、d 14組建、d 21，麻醉后開胸特點，左心室插管作用，先灌流溫?zé)幔ㄊ覝兀┥睇}水，剪開右心耳放血慢體驗，待流出液變澄清后再緩慢灌流 4% 多聚甲醛水溶液（200 mL·30 min-1）著力增加。小心摘取整個肺和心，經(jīng)氣管恒壓（2 452 Pa）灌注 4% 多聚甲醛固定液 10 min科技實力，使肺泡恢復(fù)擴(kuò)張狀態(tài)處理。沿縱軸切取肺組織浸入 4% 多聚甲醛固定液中固定 24 h，做常規(guī)石蠟包埋在此基礎上、石蠟切片助力各行、HE 染色和 Mallory 染色，光鏡觀察自主研發、攝片確定性。

2靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法

靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將白喉毒素受體與Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞啟動子通過載體融合，白喉毒素不斷刺激轉(zhuǎn)基因小鼠損耗，致肺纖維化講故事。通過敲除特定基因或?qū)胪蛔兓蚴够蛲蛔円材芙⒎卫w維化動物模型，與肺纖維化有關(guān)的基因包括：肺表面活性蛋白C性能穩定、肺表面活性蛋白A2（SFTPA2）全面革新、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）和端粒酶 RNA復(fù)合酶（TERC）。

轉(zhuǎn)基因方法的優(yōu)勢：基因技術(shù)造模方法比較于傳統(tǒng)造模方法，靶點(diǎn)明確行業分類，對篩選抗纖維化藥物意義重大技術特點。除此之外，通過誘導(dǎo)時間特定啟動子相結合，可模擬肺纖維化晚期出現(xiàn)的臨床癥狀高效化。

轉(zhuǎn)基因方法的劣勢：介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因用的病毒載體本身具有潛在危害性，且人類肺纖維化是多基因多種因子作用的結(jié)果為產業發展，因此單一的基因模型與多基因相關(guān)的肺纖維化模型存在一定差異延伸。

二、非基因相關(guān)方法致肺纖維化模型

常用的非轉(zhuǎn)基因方法主要為物理化學(xué)方法服務好，包括博萊霉su誘導(dǎo)法、平陽霉su誘導(dǎo)法反應能力、百cao枯誘導(dǎo)法共謀發展、石棉誘導(dǎo)法、輻射誘導(dǎo)法結構重塑÷牭枚?；瘜W(xué)誘導(dǎo)法及石棉誘導(dǎo)法通常通過皮下、靜脈注射高質量發展，或者霧化吸入等途徑給藥全方位，輻射誘導(dǎo)法則直接進(jìn)行射線照射。

1博萊霉su致肺纖維化模型

博萊霉su誘導(dǎo)肺纖維化有氣管內(nèi)一次給藥或多次給藥影響力範圍，也有腹腔給藥大局、鼻內(nèi)給藥、靜脈給藥邁出了重要的一步、霧化吸入多種方式有序推進。氣管內(nèi)一次給藥是常用的造模方式。

1.1 大鼠氣管內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型

步驟：選用健康雄性8~10 周齡 Wistar 大鼠需求，體質(zhì)量（250±50）g堅定不移，用 10% 水he氯醛（0.3 mL·100 g-1）腹腔內(nèi)注射麻醉，將大鼠仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺更讓我明白了，開口器固定口腔迎難而上，拉出舌，用壓she板壓舌腹探索，在額鏡直視下堅持先行，趁動物吸氣瞬間迅速行氣管插guan（Ф 2 mm，4~5 cm）滿意度，緩慢注入 5 mg·kg-1BLM 0.2~0.3 mL調整推進，立即旋轉(zhuǎn)動物，使藥液在肺內(nèi)均勻分布，自由飲水不斷創新、攝食建立和完善，d 1、d 14參與水平、d 28 采集標(biāo)本大型。

特點(diǎn)：氣管內(nèi)一次給藥法有給藥次數(shù)少、劑量小明確相關要求、制模時間短等優(yōu)點(diǎn)重要意義，但動物死亡率較高，操作復(fù)雜深化涉外，急性肺損傷程度重體系、膠原代謝紊亂的程度輕，病灶分布不均開展試點，以支氣管周圍為顯著的特點(diǎn)攜手共進。目前一次性氣管內(nèi)灌注博萊霉su誘導(dǎo)的動物肺纖維化是國內(nèi)外常用、受認(rèn)可的肺纖維化模型推進一步。

1.2 倉鼠氣管內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型

步驟：取10 周齡雄性敘利亞倉鼠經過，用生理鹽水配制 1 U 博萊霉su溶液，單次氣管內(nèi)注射 0.1 mL力度，注射藥物 3 周后明確了方向，取肺組織進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)，3H-TdR 整合實(shí)驗(yàn)評估成纖維細(xì)胞增殖效果勇探新路。

特點(diǎn)：氣管內(nèi)一次給藥法有給藥次數(shù)少單產提升、劑量小、制模時間短等優(yōu)點(diǎn)試驗，但動物死亡率較高行動力，操作復(fù)雜，急性肺損傷程度重切實把製度、膠原代謝紊亂的程度輕保供，病灶分布不均，以支氣管周圍為顯著的特點(diǎn)進行部署。目前一次性氣管內(nèi)灌注博萊霉su誘導(dǎo)的動物肺纖維化是國內(nèi)外常用責任、受認(rèn)可的肺纖維化模型。

1.3 大鼠腹腔內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型

步驟：選用健康雄性 8~10 周齡 Wistar 大鼠保護好，體質(zhì)量（250±50）g組建，每日腹腔注射 15 mg·kg-1 BLM 10 天，自由飲水運行好、攝食首次，d 1可能性更大、d 14、d 28 采集標(biāo)本搖籃。

特點(diǎn)：腹腔內(nèi)給藥法具有給藥次數(shù)多技術、劑量大、制模時間長等缺點(diǎn)推動，但動物死亡率相對較低相對較高，且操作簡便，急性肺損傷程度較輕信息、膠原代謝紊亂的程度較重相關，病灶分布均勻，以胸膜下為顯著的特點(diǎn)豐富內涵。

1.4 小鼠鼻腔滴入博萊霉su致肺纖維化模型

步驟：選用 SPF 級雌性 ICR 小鼠生產效率，6~8 周齡，體質(zhì)量16~18 g適應性，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后節點，鼻腔滴注博萊霉su造模。用yi醚麻醉小鼠面向，后用微量移液器吸取 50 μL 博萊霉su溶液（15 mg·kg-1 進(jìn)行干預(yù)），經(jīng)鼻腔緩慢滴入小鼠氣管內(nèi)研學體驗，放入鼠籠內(nèi)安置建設項目，觀察其造模后一般情況。